本文作者：林林、何廣源 單位：曾廣東省順德中醫(yī)院檢驗科

１材料與方法

１．１標本來源

取自陸軍總醫(yī)院檢驗科常規(guī)檢查健康人血清３０份。

１．２儀器與試劑

電泳儀１套；計算機（帶有Ｗｉｎｄｏｗｓ操作系統(tǒng)和安裝Ａｄｏｐｅｐｈｏｔｏｓｈｏｐ及Ｅｘｃｅｌ等軟件）１臺，掃描儀１臺（光學分辨率在１０００ｄｐｉ，吸光度２．８以上）醋酸纖維薄膜等。巴比妥緩沖液（ｐＨ８．６離子強度為０．０６ｍｏｌ／Ｌ）；配置好后用１ｍｏｌ／Ｌ氫氧化鈉（ＮａＯＨ）溶液調(diào)節(jié)ｐＨ值至８．６。染色液：０．１％氨基黑１０Ｂ，漂洗液：取蒸餾水８００ｍＬ、甲醇５０ｍＬ及冰醋酸１５０ｍＬ混合而成。透明液：石蠟油透明液。

１．３操作

參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》蛋白電泳操作方法［１］，對點樣和透明掃描幾個步驟加以改進。

１．３．１自行制備點樣器

（１）常規(guī)分析（剪切后用ＮａＯＨ浸泡洗脫比色法）：先用砂輪將蓋玻片打磨平滑，再用兩塊載玻片夾住蓋玻片，露出１ｃｍ，用透明膠紙綁緊就成了一個很好的加樣器了。（２）掃描法：把蓋玻片截掉一半，用同樣的方法綁緊。或者剪取３ｃｍ×１ｃｍ的濾紙條，加樣效果也不錯。

１．３．２透明

將脫色吹干后的薄膜浸入透明液中，約１０ｍｉｎ薄膜完全透明，然后將膜條置于潔凈、干燥的玻璃板或透明膠片上［２－３］。

１．３．３掃描

用高分辨率掃描儀透射掃描薄膜［４］，分別對血清中清蛋白（ＡＬＢ）及α１、α２、β、γ球蛋白５種成分進行掃描分析。掃描條件為５００ｄｐｉ，保存為ＲＢＧ模式ｔｉｆｆ文件。

１．３．４應用

Ａｄｏｐｅｐｈｏｔｏｓｈｏｐ軟件，將每個圖像分１０×１００個區(qū)間，并用ＩｍａｇｅＴｏｏｌ圖像分析軟件分析信息參數(shù)分別記錄各區(qū)間的Ｃ、Ｎ、Ｙ、Ｋ、∑、Ｒ、Ｌ、ａ、ｂ等圖像色譜參數(shù)數(shù)據(jù)，將上述參數(shù)導入Ｅｘｃｅｌ電子表格中，運用Ｅｘｃｅｌ的引入函數(shù)，插入圖表，識別低段等功能，可以畫出蛋白質(zhì)組分分布曲線，百分含量。

１．４方法學評價

采用配對數(shù)據(jù)ｔ檢驗，以陸軍總醫(yī)院Ｓｅｂｉａ全自動蛋白電泳分析儀為參照，分別比較掃描法和常規(guī)法與Ｓｅｂｉａ蛋白電泳儀檢測結(jié)果之間的差異，以Ｐ＜０．０５為差異有統(tǒng)計學意義。

２結(jié)果

掃描法和常規(guī)法與Ｓｅｂｉａ蛋白電泳儀檢測結(jié)果之間的差異分別見表１、２。實驗結(jié)果表明，掃描分析測定法與Ｓｅｂｉａ蛋白電泳儀檢測結(jié)果不存在差異，以Ｓｅｂｉａ全自動蛋白電泳儀檢測結(jié)果為參照，掃描分析測定法在方法學上，可以接受，各項ｔ值均小于常規(guī)法，而且在操作上省去了剪切、洗脫、比色等煩瑣工夫，避免因此而帶來的誤差。

３討論

３．１本實驗方法在電泳的前期操作與改良的常規(guī)方法一樣［５］，后期的檢測法是根據(jù)電泳圖譜的色深（吸光度值）直接反映了該區(qū)帶蛋白質(zhì)的含量，透明膠片的色深與數(shù)字化圖譜的ＲＢＧ信息參數(shù)呈反相關，與油墨量∑和Ｌ（灰度）呈正比（用油墨量∑為參數(shù)的分析結(jié)果與Ｓｅｂｉａ結(jié)果最為符合）。由于蛋白分析是測其相對含量，通過分析其色譜參數(shù)可計算出蛋白各組分的相對含量百分比。采用了計算機Ａｄｏｐｅｐｈｏｔｏｓｈｏｐ應用軟件和ＩｍａｇｅＴｏｏｌ圖像分析軟件（試用版）以及Ｅｘｃｅｌ電子表格統(tǒng)計軟件分析系統(tǒng)，但現(xiàn)在幾種軟件中的綜合使用會帶來工作量的增加，分析時間較長，離實際應用還有一段距離，這要求檢驗人員必須與軟件專業(yè)人員一起自行研究編寫一種應用。軟件該軟件能直接將圖像色譜信息參數(shù)記錄下來，并用相應的計算分析軟件（可以是Ｅｘｃｅｌ，也可以是其他數(shù)據(jù)分析軟件）分析圖像色譜參數(shù)，從而計算出蛋白質(zhì)各組分的百分含量，真正做到圖像處理、分析、計算一體，其經(jīng)濟效益和社會效益是非常有前景的。

３．２蛋白電泳的分離效果直接影響到分析結(jié)果的準確性和穩(wěn)定性，因此往后研究工作的重點在提高電泳的分離質(zhì)量［６］。總結(jié)起來，主要有如下幾方面：（１）是電泳支持物的選擇上，可以比較瓊脂糖凝膠與醋纖維膜的分離效果和穩(wěn)定性。（２）是加樣的方法上可以借鑒全自動蛋白電泳儀的加樣裝置，選擇質(zhì)地均勻、吸水性能好、蛋白質(zhì)電滲作用小的濾紙，當然還要考慮硬度和厚度等因素，可制成一排多個標本的加樣器。（３）是可購買較高配置的電泳儀，使電泳電流、電壓穩(wěn)定，增大可調(diào)電壓范圍。